استرپتوکیناز: استخراج،کلون سازی و بیان بالای پروتئین نوترکیب فعال
نویسندگان
چکیده
چکیده سابقه و هدف: استرپتوکیناز به عنوان شناخته شده ترین داروی فیبرینولیتیک، مدت مدیدی است در درمان سکته قلبی استفاده می شود. ویژگیهای ساختاری ساده این پروتئین زمینه لازم برای دستیابی به انواع نوترکیب آن را فراهم ساخته است. هدف از این تحقیق تهیه سوش استرپتوکوک equisimilis h46a (پربازده از نظر تولید استرپتوکیناز) برای اولین بار در ایران بود تا پس از استخراجdna ، ژن استرپتوکیناز بگونه ای تکثیر شود که امکان کلون سازی آن در حاملهای متعدد بوجود آید. روش بررسی: پس از استخراجdna ژنومی ژن استرپتوکیناز از دو ناحیه با استفاده از دو پرایمر بالادست و یک پرایمر پایین دست ضمن در نظر گرفتن یک جایگاه آنزیم برش دهنده معمول برای دو سر محصولات (کل orf، bp 1323 و قسمت مربوط به پروتئین بالغ، bp 1245) تکثیر شد و در حامل pgex-4t-2 تحت پروموتور قوی tac و قابلیت بیان بالا کلون شد. پلاسمید نوترکیب حاصل بوسیله عملیات هضم دو طرفه و تعیین توالی، تأیید و در اشریشیاکلی سویهbl21(de3 )plyss´ ترانسفورم شد. میزان بیان و فعالیت استرپتوکیناز نوترکیب مربوط به کلون واجد قطعه bp1245 با استفاده از دانسیتومتر لیزری و تست اختصاصی با سوبسترایs2251 در مقایسه با یک نمونه استرپتوکیناز خارجی مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: استفاده از یک آنزیم برش دهنده برای دو سر قطعه ژن، کلون شدن آن را در تعداد زیادی از حاملهای بیانی امکان پذیر ساخت. میزان بیان پروتئین نوترکیب به بیش از 45% کل پروتئینهای میزبان، موفقیت در کلون سازی را تأیید کرد. وجود دم اتصالی گلوتاتیون s ترانسفراز(gst) مانع فعالیت استرپتوکیناز نشد و مقدار آن بدون بهینه سازی و تخلیص شرایط کشت بیش از u/ml15000از کشت ثبت شد. نتیجه گیری: استفاده از حاملpgex-4t-2 ضمن تولید استرپتوکیناز نوترکیب فعال و با بازدهی فراوان، دم gst را نیز به ابتدای آمینی آن اضافه می کند که می توان از آن برای تخلیص یک مرحله ای و آسان با استفاده از لیگاند گلوتاتیون سود برد.
منابع مشابه
استرپتوکیناز: استخراج،کلون‌سازی و بیان بالای پروتئین نوترکیب فعال
Abstract: Background: Streptokinase has been widely prescribed as a fibrinolytic agent for myocardial infarction. Simple structural characteristics of this protein have provided techniques for production of different recombinant types of this protein. The present study was designed to prepare equisimilisH46A subtype of streptokinase in our country. Materials and methods: Having extracted the...
متن کاملبیان استرپتوکیناز نوترکیب استرپتوکک گروهA در باکتری اشرشیاکلی
زمینه: استرپتوکیناز A از جمله پروتئینهای ترشحی استرپتوکک پیوژن است که قدرت آنتیژنیک دارد . از این پروتئین میتوان جهت سیال کردن چرک در ذاتالریه و ورم مفصلی چرکی و همچنین به عنوان آنتیژن برای تشخیص عفونتهای استرپتوککی گروه A استفاده کرد. هدف: مطالعه به منظور تولید استرپتوکیناز استرپتوکک گروه A نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی انجام شد. مواد و روشها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختص...
متن کاملبیان استرپتوکیناز نوترکیب استرپتوکک گروهa در باکتری اشرشیاکلی
زمینه: استرپتوکیناز a از جمله پروتئینهای ترشحی استرپتوکک پیوژن است که قدرت آنتیژنیک دارد . از این پروتئین میتوان جهت سیال کردن چرک در ذاتالریه و ورم مفصلی چرکی و همچنین به عنوان آنتیژن برای تشخیص عفونتهای استرپتوککی گروه a استفاده کرد. هدف: مطالعه به منظور تولید استرپتوکیناز استرپتوکک گروه a نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی انجام شد. مواد و روشها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاص...
متن کاملبهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) باکتری لژیونلا پنوموفیلا
زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( PAL ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به عنوان یک آنتی ژن در تمام سویه های آن وجود دارد. لذا برای تشخیص بیماری لژیونر از طریق ادرار مورد توجه قرار گرفته اس...
متن کاملبهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین نوترکیب بتا دیفنسین 2 نوتروفیلهای گاو
زمینه و هدف: دیفنسینها یکی از بزرگترین خانوادهی پپتیدهای ضد میکروب میباشند که به واسطهی فعالیت بر علیه باکتریها، قارچها و بسیاری از ویروسها به عنوان آنتیبیوتیکهای نسل جدید منفعت بسیاری دارند. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین بتا دیفنسین 2 نوتروفیلهای گاو (BNBD2) بوده است. روش بررسی: در این مطالعهی تجربی-آزمایشگاهی باکتری اشرشیاکلی BL21(DE3...
متن کاملبهینه سازی بیان تولید پروتئین نوترکیب PapG.AcmA در ﺳﻮﯾﻪ بیانی اﺷﺮﯾﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ
سابقه و هدف: اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC) یکی از مهمترین باکتری های بیماری زاست که باعث عفونت مجاری ادراری می شود و هنوز هیچ واکسن انسانی علیه آن ساخته نشده است. هدف از این مطالعه، ﺑﻬﯿﻨﻪ ﺳﺎزی بیان پروتئین ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ PapG به همراه پروتئین لنگری لاکتوباسیلوس به نام AcmA در اشریشیا کلی می باشد. ﻣﻮاد و روشﻫﺎ: ژن کدکننده PapG...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهش در پزشکیجلد ۳۰، شماره ۳، صفحات ۲۴۵-۲۵۲
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023